Ensemencements

Utilisés dès la L1 (code : UE HLBI201).

        D'abord par la technique du râteau (une pipette pasteur repliée grâce à la flamme), j'ai appris à ensemencer un milieu en étalant un volume défini de solution. Ensuite, j'ai ensuite appris à faire des ensemencements pour isoler les colonies : utilisation de la méthode par stries (voir images : ensemencement par stries) sans stériliser l'anse de platine, ou par stries en stérilisant l'anse (voir images : ensemencement).

        J'ai pu apprendre à utiliser les différentes méthodes selon mes besoins. Lors de dénombrement, j'ai utilisé la technique du râteau : j'ai ensemencé différentes solutions de même volume mais à des concentrations différentes. C'est par le nombre de colonies et par le volume ensemencé que j'ai pu calculer la concentration en bactérie du milieu de départ. De plus, à partir de l'échantillon de terre, j'ai cherché à isoler (pour purifier) une colonie bactérienne. Dans ce cas, j'ai utilisé la méthode de stries avec stérilisation (de l'anse après le premier passage et le deuxième passage de l'anse sur la gélose). En effet, elle m'a permis d'isoler des colonies que j'ai pu ensemencer dans de nouvelles boîtes de pétri et au bout d'un certain nombre d'isolement (5), j'ai pu obtenir des colonies pures. La pureté des colonies m'a permis de faire des test (Galerie Api, Séquençage) pour identifier l'espèce bactérienne.

        Au-delà de la méthode d'ensemencement, le choix des milieux est aussi très important. J'ai parfois ensemencé dans des milieux non sélectifs (TCS : Gélose trypticase soja), et d'autres des milieux sélectifs. Les milieux sélectifs (utiliser aussi pour les galeries en tubes) permettent de mettre en évidence des caractéristiques des bactéries et de faire une sélection. On peut ainsi purifier des mélanges bactériens ou caractériser une espèce bactérienne. Même s'il est possible de purifier un mélange par plusieurs ensemencements sur des milieux non sélectifs ou en chauffant le mélange pour ensemencer que des bactéries résistantes à une certaine dose de chaleur (ex : pour isoler des bactéries sporulantes). D'autres facteurs (température d'incubation, humidité, pression, …) peuvent influencer la croissance bactérienne et donc favoriser la purification des échantillons.